In vivo CAR-T 疗法正推动免疫治疗从传统的体外（ex vivo）细胞操作向体内（in vivo）直接改造模式跨越，这一转变被视为行业范式革新 —— 该疗法可有效规避当前细胞治疗产品面临的制备复杂性高、生产成本高昂等痛点，为提升治疗可及性、降低临床应用门槛提供重要路径。
从前景来看，in vivo CAR-T 无需体外分离、激活与回输 T 细胞，能直接通过病毒载体在体内完成 CAR 基因的递送与 T 细胞改造，不仅简化了治疗流程，更在实体瘤等复杂适应症中展现出精准靶向潜力。然而，这一疗法的临床落地高度依赖慢病毒载体（LVV）的性能：作为体内递送 CAR 元件的核心工具，LVV 需同时实现 “T 细胞精准识别 - 激活 - 基因转导” 的三重功能，其生产的规模、纯度与一致性已成为制约 in vivo CAR-T 产业化的关键瓶颈。
In vivo CAR-T 对慢病毒载体的三大要求
In vivo CAR-T 疗法的临床转化对慢病毒载体（LVV）提出了远高于传统体外应用的质控标准，尤其在以下三个维度表现出刚性需求：
纯度控制：必须达到“体内安全级”标准
In vivo CAR-T 对 LVV 的纯度要求是前所未有的——因 LVV 需直接进入人体循环完成靶向递送，纯度标准远高于体外 CAR-T 载体（体外载体可通过细胞清洗降低杂质影响），任何杂质或异常病毒颗粒残留均可能触发安全风险。一方面，生产中残留的质粒、宿主细胞蛋白、细胞碎片等杂质，可能激活体内非特异性免疫反应；另一方面，未完整包装的病毒颗粒（如缺失关键元件的颗粒），这类颗粒无法有效转导，却可能引发脱靶结合或免疫应答。这两重风险的管控需求，共同定义了 in vivo 场景下的 “体内安全级” 纯度标准，也是保障治疗安全可预测性的核心前提。
批次一致性：确保疗效与安全的稳定性
瞬转工艺的 “批次间差异” 会直接 “损害临床疗效与安全可预测性”，这也反向凸显了in vivo CAR-T 对 LVV 批次一致性的刚性要求：无论是病毒滴度、功能比活（单位载体的转导效率），还是靶向寻靶能力，均需在不同生产批次间保持稳定。唯有如此，才能确保同一临床方案下，不同患者接受的 “有效载体剂量” 一致，避免因载体性能波动导致疗效差异或安全风险，同时满足 IND 申报对“生产过程可追溯、产品质量可重复”的硬性要求。
生产规模：匹配工业化量产需求
不同于体外 CAR-T“个体化小批量”的载体需求，in vivo CAR-T 需通过静脉或局部给药实现体内广泛寻靶，这要求 LVV 生产必须达到 “工业化量产规模”：既要支撑多中心临床试验的批量供样，也要为未来商业化阶段的大规模患者治疗储备产能，需兼容高密度细胞培养、大规模纯化的全工艺链路，否则将直接制约疗法的临床推进速度与可及性。
传统多质粒瞬转技术的先天瓶颈：难破 In vivo CAR-T 三大要求
传统多质粒瞬转技术因“临时转染、无稳定整合”的先天特性，在in vivo CAR-T慢病毒载体（LVV）的“规模、纯度、一致性”核心要求上，存在难以通过工艺优化根除的瓶颈，这些局限已被多项行业研究与临床实践证实：
纯度瓶颈：源头杂质直接威胁in vivo安全性
瞬转需向宿主细胞导入多套外源质粒（转移、包装、包膜质粒），并借助转染试剂辅助质粒进入细胞。但细胞对质粒的摄入效率天然有限（仅 30%-60%），未被摄入的残留质粒、转染试剂，以及细胞受转染压力裂解产生的宿主蛋白、碎片，会大量留存于培养体系。这些杂质与 LVV 的密度、粒径接近，后续纯化难以彻底分离，一旦随 LVV 进入人体循环，易激活非特异性免疫反应。LVV 完整包装需多质粒按精准比例协同表达，而瞬转中质粒的摄取量、胞内复制速率完全随机，无法稳定控制比例，且质粒未整合到细胞基因组，表达强度随质粒降解波动，导致大量缺失关键元件的未完整包装颗粒产生。这类颗粒无转导功能，却可能在体内引发脱靶结合或免疫应答。
一致性瓶颈：批次差异直接导致in vivo疗效波动
瞬转的批次间差异是其固有缺陷。由于缺乏稳定的基因组整合，瞬转每批次生产都需重新进行质粒转染，导致 LVV 关键指标波动显著。这种波动源于瞬转“质粒随机摄取、表达调控无标准化”的先天缺陷，即便严格控制转染时间、细胞状态等参数，也无法消除in vivo性能的批次差异，直接影响临床疗效的稳定性。
规模瓶颈：适配不了in vivo工业化供样需求
研究显示，当瞬转工艺从 10L 实验室规模放大至 100L 工业级反应器时，LVV 的体内有效转导滴度（以 PBMC 转导效率衡量）会下降 45% 以上 —— T 细胞的转导效率也将大幅下降，无法满足 in vivo 场景下 “每例患者需足量有效载体” 的需求。同时，瞬转需大量 GMP 级质粒，且随着生产规模扩大，质粒制备成本呈指数级增长。这种“规模越大、效率越低、成本越高”的特性，与in vivo CAR-T所需的工业化量产需求完全相悖，工艺优化仅能轻微提升局部效率，无法突破瞬转“临时转染”的本质局限。
稳定生产细胞系平台：从源头解决慢病毒载体生产难题
针对瞬转工艺的局限，深研生物基于合成生物学技术构建基于稳定细胞系的慢病毒载体生产平台，从源头解决 in vivo CAR-T 用 LVV 的生产难题：
基因组整合 + 可诱导调控，实现表达稳定性
平台通过转座子介导的基因组整合，将所有病毒组件（含靶向分子、包膜蛋白编码序列）稳定插入细胞基因组，替代瞬转的 “临时质粒”；同时搭载可诱导遗传回路，实现 “细胞生长与载体生产分离”—— 扩增阶段专注增殖，生产阶段精准启动病毒表达，确保靶向分子与包膜蛋白的比例长期稳定，从根源解决协同表达问题。
高通量筛选 + 标准化细胞库，保障产品质量一致
依托于自主研发的 EuBioX 高通量自动化筛选平台，可高效评估数万个克隆，严格筛选单克隆性、滴度、转导效率等指标，最终确定性能最优的稳定细胞系。基于该细胞系构建的标准化细胞库，可实现不同批次的 LVV 生产条件统一，关键指标波动极小，完全匹配 IND 申报与临床规模化需求。
高滴度 + 强扩展性，支撑产业化需求
文档数据显示，SPCL 优选的单克隆在贴壁培养中可稳定较瞬转提升 20 倍；同时具备优异的工业级扩展性 —— 高密度细胞生长稳定，功能颗粒 / 细胞（q 值）表现优异，且与下游纯化工艺高度兼容，可快速衔接 cGMP 生产，为 in vivo CAR-T 的规模化临床与商业化提供核心支撑。
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